Buenas, tengo el siguiente sprite 
y quiero separar cada sprite para ponerla en la animación de pila
hola @Dyron_D, para hacerlo debes usar un programa de dibujo o editor de imágenes. Yo uso gimp el cual es de código abierto, grátis y muy similar al fotoshop, pero no es fácil de aprender a usar.
Otra alternativa mucho más sencilla es usar un programa llamado mtpaint con el cuál deberás: abrir la imagen, borrar todos los sprite hasta que quede uno, guardar como nueva imagen y repetir hasta que tengas cada sprite en una imagen por separado. Es importante recordar que cada imagen debe tener el fondo en transparente y ser tan pequeña como el sprite, algo que por ejemplo, el paint de toda la vida no hace.
Otra opción es usar alguno de estos sitios para recortar imágenes, como este Cut photo into equal parts online - IMG online, lo que sí creo que vas a necesitar un programar de dibujo de todas formas para asegurarte que el fondo del personaje sea transparente como dice @lukeitor